［摘要］目的??? 观察松花粉的抗衰老作用。 方法??? 用含松花粉的饲料喂养衰老小鼠，测定小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH.Per）的活性，测定脑组织中丙二醛（MDA）含量及脑组织和肝脏中的脂褐质（Lf）含量，同时测定胸腺和脾脏的重量及网状内皮系统的吞噬功能。结果??? 松花粉能明显增加衰老小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性，降低脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量，并增加胸腺和脾脏质量，提高网状内皮系统吞噬功能。 结论??? 松花粉具有抗衰老作用。
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　　 ［关键词］ 松花粉;抗衰老;超氧化物歧化酶;免疫吞噬系统功能;小鼠
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　　 松花粉药名松黄，是松科植物马尾松、油松或同属数种植物于春季花刚开时采摘花穗晒干收集，除去杂质所得的淡黄色细花粉。其成分稳定、不含激素，是花粉产品中的佼佼者。本实验旨在研究松花粉对小鼠的抗衰老作用。

　　1 材料和方法
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　　 1.1 材料
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　　 超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH.Per）、丙二醛（MDA）、脂褐质（Lf）及蛋白定量测定试剂盒购自南京建成生物医学工程研究所，松花粉由中国林业学院亚热带林业研究所提供，为天然松花粉。含松花粉的小鼠饲料为自行配制，按质量比配成含松花粉2%、5%的饲料。昆明种小鼠体重18～22g，由第一军医大学南方医院动物所提供。
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　　 1.2 方法
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　　 昆明种小鼠40只，雌雄兼用，其中10只月龄为3个月，构成青年对照组，普通饲料喂养;另外30只月龄为20个月，随机分成3组:（1）衰老对照组10只，普通饲料喂养;（2）衰老小鼠10只，用含2%松花粉饲料喂养;（3）衰老小鼠10只，用含5%松花粉饲料喂养。青年小鼠体重为（19.2±2.0）g，衰老小鼠体重为（19.8±2.1）g，衰老小鼠由第21个月开始，按不同分组喂养不同饲料，喂养30d。

　　1.3 实验指标测定
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　　 1.3.1 血清中的SOD、CAT、GSH.Per活性，脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量的测定 喂养30d后，于第31天将实验小鼠断头取血于肝素抗凝管内离心备用，迅速取脑和肝脏，用预冷的生理盐水制成10%组织匀浆，按试剂盒说明书中的方法测定血清中的SOD、CAT、GSH.Per活性，脑组织中MDA含量及脑组织和肝脏中的Lf含量。
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　　 1.3.2 免疫器官重量测定 喂养30d后，摘取胸腺和脾脏，用电子天平称重，记录器官质量。
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　　 1.3.3 网状内皮系统吞噬功能试验 喂养30d后，经尾静脉注入印度墨汁（用生理盐水稀释5倍）10ml·kg -1 ，注入后1min和5min分别从眼眶静脉取血20μl，溶于01%Na 2 CO 3 溶液2ml中摇匀，用722型光栅分光光度计（λ=680nm）比色测定光密度，计算吞噬指数κ（κ=100个巨噬细胞所吞噬鸡红细胞的总和/100），取肝、脾称重，求出吞噬活性α［α=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞）×100］。

　　1.4 统计方法
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　　 应用SPSS10.0统计软件进行统计分析，数据采用x±s表示，多组间样本均数的比较采用方差分析，其中两组间比较采用最小显著差法。
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　　 2 结果
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　　 2.1 动物的一般状况
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　　 给予松花粉喂养的两组小鼠，生长良好、皮毛光滑、活动敏捷，每周称重1次，体重依次递增，第1周末（20.7±2.3）g，第2周末（21.8±4.5）g，第3周末（22.3±3.6）g。青年对照组小鼠生长良好，皮毛光滑、反应敏捷，第1周末体重（19.5±1.6）g，第2周末（20.1±2.0）g，第3周末（20.4±1.4）g。衰老对照组小鼠生长良好，皮毛粗糙、反应迟钝、活动缓慢，第1周末体重（20.3±0.5）g，第2周末（20.7±0.8）g，第3周末（19.6±2.3）g。
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　　 2.2 松花粉对衰老小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性的影响
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　　 衰老对照组小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per活性显著低于青年对照组小鼠（均为P<0.05）;而松花粉喂养的两组小鼠血清中SOD、CAT、GSH.Per的活性显著高于衰老对照组小鼠（均为P<0.05）。见表 1。

　　表1 松花粉对小鼠血清SOD、CAT、GSH.Per活性的影响（略）
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　　 2.3 松花粉对衰老小鼠脑组织MDA含量及脑组织和肝脏中Lf含量的影响
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　　 衰老对照组小鼠脑组织中MDA含量明显增高，而喂养松花粉的小鼠脑组织中的MDA含量明显降低，5%松花粉喂养组小鼠脑组织中MDA的含量与衰老对照组小鼠比较有显著性差异（P<0.05）;衰老对照组小鼠脑、肝组织中Lf含量显著高于青年正常对照组（均为P<0.05），松花粉均能使衰老小鼠脑组织中和肝脏组织中的Lf含量明显降低（均为P<0.05）。见表2。
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　　 表2 松花粉对小鼠脑和肝脏MDA及Lf含量的影响（略）
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　　 2.4 松花粉对小鼠免疫器官的影响
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　　 衰老对照组小鼠的胸腺和脾的重量显著低于青年对照组（均为P<0.05），用松花粉喂养后可明显增加衰老小鼠胸腺和脾脏的质量，接近并可能超过青年对照组小鼠。见表3。
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　　 表3 松花粉对小鼠免疫器官质量的影响（略）
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　　 2.5 松花粉对小鼠网状内皮系统的影响
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　　 衰老对照组小鼠的吞噬指数和吞噬活性显著低于青年对照组（均为P<0.05），2%和5%松花粉喂养组小鼠的吞噬指数和吞噬活性显著高于衰老组小鼠（均为P<0.05）。见表4。
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　　 表4 松花粉对小鼠网状内皮系统的影响（略）
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　 　3 讨论
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　　 衰老的病因和机制尚未明了，但是自由基学说是公认的衰老学说之一 ［1］ ，机体每天代谢时产生的自由基分子，在正常情况下可被清除，但在机体衰老时，体内抗氧化物质CAT、SOD、GSH.Per等抗氧化酶的活性均降低，而自由基代谢产物MDA含量却明显增高，MDA可进一步与磷脂酰乙醇胺和蛋白交联，生成无活性的Lf，沉积于组织和细胞，使RNA持续性降低，破坏细胞的结构，最后导致细胞无法维持代谢而衰老死亡 ［2］ 。因此提高抗氧化酶的活性，防止自由基对机体的危害，对延缓衰老过程有积极的作用。中医衰老学说中五脏损、阴阳失衡、气血失和及禀赋不足等是较为公认的。中医理论认为机体功能减退系肾虚所致，肾虚导致机体津液不足、调理失调、风寒湿热难抵、机体功能减退，肾虚则气滞，气滞则无力推动血运，引起血瘀，气虚则血瘀，血瘀则衰老渐至 ［3］ 。机体衰老时调节免疫功能、应激能力、耐疲劳能力均显著降低 ［4］ ，清除自由基和抗氧化能力降低 ［5］ 。
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　　 松花粉药名松黄，为鲜黄色或淡黄色细粉，其性味甘平无毒，松花粉含有高达二百余种营养成分，包括大多数的维生素、氨基酸、酶，其中每种成分含量均较大，同等重量的松花粉蛋白质总量较牛肉、鸡蛋多7～10倍，矿物质铁比菠菜含量高20倍，维生素A原型胡萝卜素要多20～30倍，更难得的是松花粉所含的二百余种营养成分全部具有活性。药理实验证明，松花粉中含有大量抗氧化物质，如维生素E、胡萝卜素及微量元素硒，可以抑制体内脂肪和蛋白质过氧化反应，具有延缓衰老的作用。松花粉进入人体后，可使SOD的活性增强，量级提高，增强清除自由基的能力，同时能清除沉积在皮肤表面和脑、心、肝等器官组织中的的老年斑，可抑制组织胞化，抑制人体衰老，提高人体免疫能力。松花粉明显改善D.半乳糖衰老模型小鼠T细胞亚群的变化，增强衰老鼠的免疫功能，能延长老龄鼠的生存时间 ［6］ 。本实验结果显示，给予衰老小鼠喂养含松花粉的饲料可以明显降低衰老小鼠脑组织MDA含量、脑和肝组织Lf含量，明显提高衰老小鼠血清中CAT、SOD、GSH.Per活性，表明松花粉可以提高机体抗氧化能力，有力清除衰老或老化机体过多生成的自由基，并且能增加免疫器官的重量，提高小鼠网状内皮系统的吞噬能力，起到延缓衰老的作用。